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Wie viel wissen Sie über den Nachweis von Nukleinsäuren?
Seit dem Ausbruch von COVID-19 ist der Begriff „Nukleinsäuretests“ zu einem hochfrequentierten Wort geworden. Ein positiver Nukleinsäuretest ist ein wichtiges Kriterium für die Diagnose von COVID-19. WST-8 ist zur API für Nukleinsäure-Testkits geworden. Wie viel wissen Sie über Nukleinsäuretests? Was ist das Prinzip des Nukleinsäurenachweises? Warum haben Nukleinsäuretests falsch negative Ergebnisse? Welche anderen Technologien können neben Nukleinsäuretests das neue Coronavirus nachweisen?
Entmystifizierung des Prinzips des Nukleinsäurenachweises eines neuen Coronavirus
Beim Nukleinsäuretest geht es eigentlich darum, festzustellen, ob sich im Körper der Testperson Nukleinsäure (RNA) des neuen Coronavirus befindet. Die Nukleinsäure jedes Virus enthält Ribonukleotide, und die Anzahl und Reihenfolge der in verschiedenen Viren enthaltenen Ribonukleotide ist unterschiedlich, was jedes Virus spezifisch macht.
Auch die Nukleinsäure des neuen Coronavirus ist einzigartig, und der Nukleinsäurenachweis ist der spezifische Nachweis der Nukleinsäure des neuen Coronavirus. Vor dem Nukleinsäuretest müssen Proben von Sputum, Rachenabstrich, bronchoalveolärer Spülflüssigkeit, Blut usw. des Probanden entnommen werden. Durch die Untersuchung dieser Proben kann festgestellt werden, dass die Atemwege des Probanden mit Bakterien infiziert sind. Der Nachweis neuer Coronavirus-Nukleinsäuren wird häufig zum Nachweis von Rachenabstrichproben verwendet. Die Probe wird gespalten und gereinigt, daraus die mögliche neue Coronavirus-Nukleinsäure extrahiert und schon sind die Vorbereitungen für den Test fertig.
Der neue Nachweis von Coronavirus-Nukleinsäuren nutzt hauptsächlich die quantitative Fluoreszenz-RT-PCR-Technologie, eine Kombination aus quantitativer Fluoreszenz-PCR-Technologie und RT-PCR-Technologie. Im Nachweisverfahren wird die RT-PCR-Technologie eingesetzt, um die Nukleinsäure (RNA) des neuen Coronavirus revers in die entsprechende Desoxyribonukleinsäure (DNA) zu transkribieren; Anschließend wird die quantitative Fluoreszenz-PCR-Technologie verwendet, um die erhaltene DNA in großen Mengen zu replizieren. Die replizierte DNA wird mit einer Geschlechtssonde nachgewiesen und markiert. Wenn eine neue Coronavirus-Nukleinsäure vorhanden ist, kann das Instrument das Fluoreszenzsignal erkennen, und während sich die DNA weiter repliziert, nimmt das Fluoreszenzsignal weiter zu und erkennt so indirekt das Vorhandensein des neuen Coronavirus.
Warum kommt es zu falsch-negativen Ergebnissen?
Ein falsch negatives Ergebnis bedeutet, dass die getestete Person mit dem neuen Coronavirus infiziert war, die Nukleinsäure des Virus jedoch nicht nachgewiesen wurde, d. h. der Nukleinsäuretest ist negativ. Wenn ein Proband keine relevanten Symptome aufweist und der Nukleinsäuretest negativ ist, kann er leicht seine Wachsamkeit nachlassen, was zu einer weiteren Verbreitung des Virus führen kann, was auch die Tücke des neuen Coronavirus darstellt.
Es gibt drei Hauptgründe für falsch negative Ergebnisse:
Erstens ist der Nukleinsäuregehalt des neuen Coronavirus in der ursprünglichen Testprobe zu niedrig und liegt unterhalb der unteren Nachweisgrenze. Dies hängt mit der Art der entnommenen Probe und dem Zeitpunkt der Entnahme zusammen.
Zweitens: Wenn die Stelle, an der die neue Coronavirus-Nukleinsäure an die Sonde bindet, mutiert, kann dies die Bindungseffizienz der Sonde beim Nachweis beeinträchtigen, was zu einem nicht nachweisbaren Fluoreszenzsignal führt.
Drittens hängen falsch-negative Ergebnisse auch mit der Empfindlichkeit der Erkennungstechnologie zusammen. Im Frühstadium des Ausbruchs waren die klinischen Kits nicht ausgereift genug und ihre Empfindlichkeit nicht hoch genug, und es gab häufig Berichte über falsch negative Ergebnisse. Später, mit der Verbesserung des technischen Niveaus, stieg die Genauigkeitsrate der Erkennung rapide an und die Falsch-Negativ-Rate nahm weiter ab.
Ist ein positiver Nukleinsäuretest eine Diagnose?
Ein positives Nukleinsäuretestergebnis kann das Vorhandensein viraler Nukleinsäure in den oberen Atemwegen des Probanden bestätigen, es kann jedoch nicht direkt als Patient mit neuer Koronarpneumonie diagnostiziert werden. Im Falle eines positiven Nukleinsäuretests sollte die Person anhand der epidemiologischen Vorgeschichte weiter diagnostiziert werden. Kontakthistorie etc. kann als bestätigter Fall diagnostiziert werden.
Wenn der Patient keine relevanten Symptome aufweist, wird im Allgemeinen eine asymptomatische Infektion diagnostiziert. Asymptomatische Infektionen sind ebenfalls ansteckend, und einige asymptomatische Infektionen zeigten später Symptome und wurden zu bestätigten Patienten.
Andere Technologien zur Erkennung des neuen Coronavirus
Für die Probanden ist die Isolierung des Virus aus der Probe die aussagekräftigste Grundlage für die Diagnose. Allerdings ist die Isolierung des Virus ein relativ gefährlicher Vorgang, der in einem Labor mit hohem Schutzniveau durchgeführt werden muss und zeitaufwändig und kostspielig ist. . Allgemeinmedizinische Einrichtungen kennen diese Erkrankung nicht. Die meisten von ihnen verwenden die Methode des Nachweises, ob Virusantikörper im Blut vorhanden sind, um festzustellen, ob die Person mit dem Virus infiziert ist. Hepatitis B, AIDS usw. werden auf diese Weise getestet.
Mit dieser immunologischen Nachweismethode kann auch das neue Coronavirus nachgewiesen werden. Angesichts der Invasion des neuen Coronavirus wird der menschliche Körper „Widerstand“ leisten und spezifische Antikörper IgM und IgG (Immunglobulin M und Immunglobulin G) produzieren. Werden diese beiden spezifischen Antikörper im Blut des Probanden nachgewiesen, kann das ein Hinweis darauf sein, dass der Proband mit dem neuen Coronavirus infiziert ist.
Wie erkennt man Antikörper? Die häufig verwendete Methode ist der Chemilumineszenz-Immunoassay, d. h. die Verwendung von Chemilumineszenzreagenzien oder spezifischen Enzymen zur Markierung von Antikörpern oder Antigenen, die Bildung von Komplexen durch Immunreaktion und die anschließende Zugabe von Lumineszenzreagenzien nach dem Waschen. Speziesspezifische Antikörper, das Chemilumineszenz-Instrument kann das Lumineszenzsignal erkennen. Dieser Chemilumineszenz-Immunoassay ist derzeit eine der fortschrittlichsten Immunoassay-Techniken. Es verfügt über eine hohe Empfindlichkeit, starke Spezifität, einen großen Nachweisbereich und schnelle Ergebnisse, aber die Nachweiskosten sind hoch.
Da es außerdem eine gewisse Zeit dauert, bis der menschliche Körper nach einer Infektion mit dem Virus Antikörper produziert, kann dieser erst nach der Produktion der Antikörper nachgewiesen werden, was ebenfalls zu einer schlechten Aktualität des Antikörpernachweises führt. Nach einer Infektion wie Hepatitis B und AIDS dauert es 2 bis 3 Wochen, bis Antikörper gebildet werden. Nach einer neuen Coronavirus-Infektion dauert der Nachweis von IgM-Antikörpern mehr als drei Tage und der Nachweis von IgG-Antikörpern mehr als eine Woche.
Um den Schwanz des neuen Coronavirus so schnell wie möglich zu fangen, wird daher ein stärkerer Nukleinsäurenachweis eingesetzt, der die Spuren des neuen Coronavirus früher erkennen kann.
